Вернуться на главную

Вернуться   Форум выживальщиков » Общий раздел » Дебри бамбука Панды
Все разделы прочитаны
Регистрация Справка Календарь

Важная информация

Дебри бамбука Панды Раздел для панды (модерация на общих основаниях)

Ответ
 
Опции темы Опции просмотра
Старый 25.04.2020, 19:08
Satir
Готовящийся
 
Аватар для Satir
 
Регистрация: 26.09.2014
Адрес: Севернее не сошлют
Сообщений: 4,517
Сказал(а) спасибо: 1,691
Поблагодарили 4,772 раз(а) в 2,481 сообщениях
По умолчанию SARS-подобная группа циркулирующих коронавирусов летучих мышей демонстрирует потенциал для появления человека. Ч.2

Продолжение статьи «SARS-подобная группа циркулирующих коронавирусов летучих мышей демонстрирует потенциал для появления человека»
Нажмите здесь, чтобы увидеть весь текст

методы

Вирусы, клетки, инфекции in vitro и анализы на бляшки.

SARS-CoV дикого типа (Urbani), адаптированные для мыши SARS-CoV (MA15) и химерные SARS-подобные CoV культивировали на клетках Vero E6 (полученных из Института инфекционных болезней Армии США), выращенных в модифицированном по Дульбекко Eagle's. среда (DMEM) (Gibco, CA) и 5% фетальная клоновая сыворотка (FCS) (Hyclone, South Logan, UT) вместе с антибиотиком / антимикотиком (Gibco, Carlsbad, CA). Клетки DBT (лаборатория Baric, источник неизвестен), экспрессирующие ортологи ACE2, были ранее описаны как для человека, так и для циветты; Последовательность Ace2 летучей мыши была основана на последовательности из Rhinolophus leschenaulti, и клетки DBT, экспрессирующие Ace2 летучей мыши, были созданы, как описано ранее8. Эксперименты с псевдотипированием были аналогичны экспериментам с использованием псевдовируса на основе ВИЧ, приготовленного, как описано ранее10, и исследованного на клетках HeLa (Институт вирусологии Ухани), которые экспрессировали ортологов ACE2. Клетки HeLa выращивали в минимальной необходимой среде (MEM) (Gibco, CA) с добавлением 10% FCS (Gibco, CA), как описано ранее24. Кривые роста в Vero E6, DBT, Calu-3 2B4 и первичных эпителиальных клетках дыхательных путей человека выполняли, как описано ранее8,25. Ни один из запасов рабочей клеточной линии не был аутентифицирован или проверен на микоплазму в последнее время, хотя исходные запасы семян, используемые для создания рабочих запасов, не были загрязнены. Человеческие легкие для культур HAE были закуплены в соответствии с протоколами, утвержденными Советом по институциональному обзору Университета Северной Каролины в Чапел-Хилл. Культуры HAE представляют собой высокодифференцированный эпителий дыхательных путей человека, содержащий реснитчатые и не ресничные эпителиальные клетки, а также бокаловидные клетки. Культуры также выращивают на границе раздела воздух-жидкость в течение нескольких недель перед использованием, как описано ранее26. Вкратце, клетки промывали PBS и инокулировали вирусом или имитировали разведением в PBS в течение 40 минут при 37 ° C. После инокуляции клетки трижды промывали и добавляли свежую среду для обозначения времени «0». Три или более биологических повторностей собирали в каждый описанный момент времени. Никакие слепые действия не использовались ни в каких выборках, и образцы не были рандомизированы. Все культивирование вирусов проводилось в лаборатории уровня биобезопасности (BSL) 3 с избыточными вентиляторами в шкафах биобезопасности, как описано ранее нашей группой2. Весь персонал носил мощные респираторы для очистки воздуха (Breathe Easy, 3M) с костюмами Tyvek, фартуками и пинетками и носил двойные перчатки.

Кластеризация последовательностей и структурное моделирование.

Геномные последовательности полной длины и аминокислотные последовательности доменов S1 пика репрезентативных CoV были загружены из Genbank или Центра интеграции ресурсов Pathosystems (PATRIC), выровнены с ClustalX и филогенетически сопоставлены с использованием оценки максимальной вероятности с использованием 100 загрузочных ловушек или путем используя пакет PhyML (https://code.google.com/p/phyml/) соответственно. Дерево было сгенерировано с использованием максимального правдоподобия с пакетом PhyML. Шкала представляет нуклеотидные замены. Только узлы с поддержкой начальной загрузки выше 70% помечены. Дерево показывает, что CoVs делятся на три отдельные филогенетические группы, определяемые как α-CoV, β-CoV и γ-CoV. Классические кластеры подгрупп отмечены как 2a, 2b, 2c и 2d для β-CoV и 1a и 1b для α-CoV. Структурные модели были созданы с использованием Modeller (Инструментарий Биоинформатики Института Макса Планка) для создания моделей гомологии для SHC014 и Rs3367 RBD SARS в комплексе с ACE2 на основе кристаллической структуры 2AJF (Protein Data Bank). Модели гомологии визуализировали и манипулировали в MacPyMol (версия 1.3).

Конструирование SARS-подобных химерных вирусов.

Как вирус дикого типа, так и химерный вирус были получены либо из SARS-CoV Urbani, либо из соответствующего адаптированного к мыши (SARS-CoV MA15) инфекционного клона (ic), как описано ранее27. Плазмиды, содержащие последовательности спайков для SHC014, экстрагировали рестриктазой и лигировали в плазмиду E и F инфекционного клона MA15. Клон был сконструирован и приобретен в Bio Basic в виде шести смежных кДНК с использованием опубликованных последовательностей, фланкированных уникальными сайтами рестрикционной эндонуклеазы класса II (BglI). После этого плазмиды, содержащие фрагменты химерного генома SARS-CoV и SHC014-CoV дикого типа, амплифицировали, вырезали, лигировали и очищали. Затем были проведены реакции транскрипции in vitro для синтеза полноразмерной геномной РНК, которая была трансфицирована в клетки Vero E6, как описано ранее2. Среду из трансфицированных клеток собирали и использовали в качестве семян для последующих экспериментов. Химерные и полноразмерные вирусы были подтверждены анализом последовательности перед использованием в этих исследованиях. Синтетическая конструкция химерного мутанта и полноразмерного SHC014-CoV была одобрена Комитетом институциональной биобезопасности Университета Северной Каролины и Комитетом по исследованию двойного использования Концерна.

Этика заявление.

Это исследование было проведено в соответствии с рекомендациями по уходу и использованию животных, проведенными Управлением лабораторного благосостояния животных (OLAW), NIH. Институциональный комитет по уходу и использованию животных (IACUC) Университета Северной Каролины в Чапел-Хилл (UNC, номер разрешения A-3410-01) утвердил протокол исследования на животных (IACUC # 13-033), используемый в этих исследованиях.

Мыши и заражение in vivo.

Самок мышей 10-недельного и 12-месячного возраста BALB / cAnNHsD заказывали в Harlan Laboratories. Инфекции мыши были сделаны, как описано ранее20. Вкратце, животных доставляли в лабораторию BSL3 и позволяли акклиматизироваться в течение 1 недели до заражения. Для заражения и вакцинации против живых аттенуированных вирусов мышей анестезировали смесью кетамина и ксилазина и инфицировали интраназально, когда им заражали, 50 мкл фосфатно-солевого буфера (PBS) или разбавленного вируса тремя или четырьмя мышами в каждый момент времени, инфекционная группа на дозу, как описано на рисунке легенды. Для отдельных мышей обозначения для инфекции, включая неспособность вдохнуть всю дозу, образование пузырьков инокулята из носа или инфекцию через рот, могли привести к исключению данных о мышах на усмотрение исследователя; после заражения другие заранее установленные критерии исключения или включения не определены. Никакого ослепления не использовали ни в каких экспериментах на животных, и животных не рандомизировали. Для вакцинации молодых и старых мышей вакцинировали путем инъекции в подушечку лапки объемом 20 мкл либо 0,2 мкг дважды инактивированной вакцины SARS-CoV с квасцами, либо фиктивным PBS; затем мышам вводили тот же режим через 22 дня, а затем через 21 день. Для всех групп, согласно протоколу, животных ежедневно проверяли на наличие клинических признаков заболевания (гниение, взъерошенный мех и снижение активности) в течение всего эксперимента. Потери веса ежедневно отслеживались в течение первых 7 дней, после чего мониторинг веса продолжался до тех пор, пока животные не восстановились до своего первоначального начального веса или не показали непрерывного увеличения веса в течение 3 дней. Всех мышей, потерявших более 20% от их начальной массы тела, кормили грудью и проводили дальнейший мониторинг несколько раз в день, пока они находились ниже предела 20%. Мышей, которые потеряли более 30% своей начальной массы тела, немедленно убивали согласно протоколу. Любая мышь, которая считается умирающей или вряд ли выздоровеет, была также гуманно принесена в жертву по усмотрению исследователя. Эвтаназия была выполнена с использованием передозировки изофлурана и смерть была подтверждена смещением шейки матки. Все исследования на мышах проводились в Университете Северной Каролины (Обеспечение благополучия животных # A3410-01) с использованием протоколов, утвержденных Комитетом UNC по уходу за животными и их использованию (IACUC).

Гистологический анализ.

Левое легкое удаляли и погружали в 10% забуференный формалин (Fisher) без инфляции на 1 неделю. Ткани были заделаны в парафин, и 5-мкм срезы были подготовлены основным центром гистопатологии UNC Lineberger. Чтобы определить степень окрашивания антигена, срезы окрашивали на вирусный антиген с использованием коммерчески доступного поликлонального антитела против нуклеокапсида SARS-CoV (Imgenex) и оценивали слепым способом для окрашивания дыхательных путей и паренхимы, как описано ранее20. Изображения были получены с помощью микроскопа Olympus BX41 с камерой Olympus DP71.

Анализы нейтрализации вирусов.

Анализы титра нейтрализации с уменьшением зубного налета проводили с ранее охарактеризованными антителами против SARS-CoV, как описано ранее 11,12,13. Вкратце, нейтрализующие антитела или сыворотку серийно разводили в два раза и инкубировали с 100 п.н. штаммов различных инфекционных клонов SARS-CoV в течение 1 ч при 37 ° С. Затем вирус и антитела добавляли в 6-луночный планшет с 5 × 105 клеток Vero E6 / лунку с множественными повторностями (n ≥ 2). После 1-часовой инкубации при 37 ° С клетки покрывали 3 мл 0,8% агарозы в среде. Планшеты инкубировали в течение 2 дней при 37 ° С, окрашивали нейтральным красным в течение 3 часов и подсчитывали бляшки. Процент уменьшения бляшек рассчитывали как (1 - (количество бляшек с антителом / количество бляшек без антитела)) × 100.

Статистический анализ.

Все эксперименты проводились на контрасте двух экспериментальных групп (либо два вируса, либо вакцинированные и невакцинированные когорты). Следовательно, значимые различия в титре вируса и гистологической оценке были определены с помощью двустороннего критерия Стьюдента в отдельные моменты времени. Данные обычно распределялись в каждой сравниваемой группе и имели сходную дисперсию.

Биобезопасность и биобезопасность.

Отмеченные исследования были начаты после того, как Комитет по биобезопасности Университета Северной Каролины утвердил экспериментальный протокол (Название проекта: Создание инфекционных клонов SARS-подобных CoVs летучих мышей; Идентификатор плана безопасности лаборатории: 20145741; Идентификатор G-графика: 12279). Эти исследования были начаты до приостановки финансирования исследований правительства по процессу обсуждения отдельных исследований, посвященных получению дополнительных функций, включая вирусы гриппа, MERS и SARS (http://www.phe.gov/s3/dualuse/Docume...in-of-function). .pdf). Этот документ был рассмотрен финансирующим агентством, NIH. Было запрошено продолжение этих исследований, и это было одобрено NIH.

SARS-CoV является избранным агентом. Все работы для этих исследований были выполнены с утвержденными стандартными операционными процедурами (СОП) и условиями безопасности для SARS-CoV, MERs-CoV и других связанных CoV. Наши учреждения CoV BSL3 были разработаны в соответствии с требованиями безопасности, которые рекомендованы в Биобезопасности в микробиологических и биомедицинских лабораториях (BMBL), Министерстве здравоохранения и социальных служб США, Службе общественного здравоохранения, Центрах контроля заболеваний (CDC) ) и NIH. Планы лабораторной безопасности были представлены, и объект был одобрен для использования Департаментом охраны окружающей среды и здоровья (EHS) UNC и CDC. Доступ к электронной карте необходим для входа в объект. Все работники были обучены EHS безопасному использованию респираторов с очистителем воздуха (PAPR), соответствующим рабочим привычкам на объекте BSL3 и планам активного медицинского наблюдения. Наше оборудование CoV BSL3 содержит резервные вентиляторы, аварийное питание вентиляторов, шкафы биологической безопасности и морозильные камеры, а на наших объектах можно разместить мышиные стойки SealSafe. [Материалы, классифицируемые как агенты BSL3, состоят из SARS-CoV, штаммов-предшественников Bat CoV, MERS-CoV и мутантов, полученных из этих патогенов. На объектах BSL3 эксперименты с инфекционным вирусом проводятся в сертифицированном кабинете биобезопасности класса II (BSC). Все сотрудники носят скрабы, костюмы и фартуки Tyvek, PAPR и бахилы, а на руках - двойные перчатки. Пользователи BSL3 подчиняются плану медицинского наблюдения, который контролируется Университетской клиникой гигиены труда (UEOHC), которая включает ежегодную физическую, ежегодную вакцинацию против гриппа и обязательное сообщение о любых симптомах, связанных с инфекцией CoV, в периоды работы в BSL3. Все пользователи BSL3 обучены управлению протоколами облучения и отчетности, подготовлены к самостоятельному карантину и обучены безопасной доставке в местное отделение по борьбе с инфекционными заболеваниями в чрезвычайной ситуации. Все потенциальные события воздействия сообщаются и расследуются EHS и UEOHC, а отчеты направляются как в CDC, так и в NIH.[/SPOILER]

---------- Сообщение добавлено в 19:08 ---------- Предыдущее сообщение размещено в 18:36 ----------

Вариант звоночка для вирусных инфекций
Цитата:
И хотя и не было известно ни о какой инфекции коронавирусного штамма, способного заразить человека - в это-же время в США активно набирала обороты "другая" инфекция со схожими симптомами.
31 августа 2019 года в той же The New York Times появляется материал о развитии в Америке таинственной эпидемии неизвестной доселе болезни лёгких (на момент выхода статьи – 215 заражённых). В мире эта история обрела известность как "легочное заболевание, вызываемое электронными сигаретами".
Под подозрение врачей и медицинских чиновников попали канабис, электронные сигареты и их жидкостные аналоги (вейп),
однако не исключалась и вирусно-бактериальная природа тяжёлого заболевания лёгочной системы - ведь болели и те, кто вообще ничего не курил.
В середине сентября президент Дональд Трамп с подачи Центров по контролю и профилактике заболеваний (Centers for Disease Control and Prevention, CDC) созвал по этому поводу специальное совещание, в то время как власти ряда штатов, не имея какого либо физиологического обоснования, усиленно добивались запрета продажи некоторых видов смесей для электронных сигарет, до полного изучения природы заболевания.
Тем не менее только на 1 октября 2019 года в США было зафиксировано 1080 случаев этого заболевания в 48 штатах и на Виргинских островах (на 25% больше, чем за неделю до того), включая смертельные случаи.
Предположения о возможной «коронавирусной» природе заболевания оставались не исследованы должным образом, а число заболевших росло.
Кроме того, сообщается о никогда не бывавших в Китае инфицированных гражданах Японии в сентябре 2019 года на Гавайях.
https://yandex.ru/turbo?text=https%3...ture%2F7065484

<img src=http://s019.radikal.ru/i626/1604/d3/a8b4212219b1.jpg class=bbCodeImage border=0 alt= />
Никто не забыт!
Ничто не забыто!

Благими намерениями выстлан путь в Ад
Не делай добра - не будет и зла!

Мы убиваем время - оно убивает нас...
Не бойся делать то, чего не умеешь. Помни, Ковчег был построен любителем. Профессионалы построили Титаник.

Последний раз редактировалось Satir; 25.04.2020 в 18:44..
Satir вне форума   Ответить с цитированием
Пользователь сказал cпасибо:
АсПирин (26.04.2020)
Это может быть интересно
Старый 26.04.2020, 11:53
Гастербайтер
Выживальщик
 
Аватар для Гастербайтер
 
Регистрация: 14.11.2018
Адрес: UA
Сообщений: 1,225
Сказал(а) спасибо: 1,499
Поблагодарили 643 раз(а) в 491 сообщениях
По умолчанию

Я вообще читал, что этим коронавирусом уже давно болели и многие переболели. Как только начнут массово делать тесты может оказаться, что антитела есть у очень многих.

Все лучшее в жизни бесплатно
Гастербайтер вне форума   Ответить с цитированием
Старый 30.04.2020, 02:14
Скржитек
Модератор форума
 
Аватар для Скржитек
 
Регистрация: 22.06.2012
Адрес: ДальнийВосток
Сообщений: 9,216
Сказал(а) спасибо: 4,706
Поблагодарили 18,581 раз(а) в 7,224 сообщениях
По умолчанию


эпоха перемен... блин
Скржитек вне форума   Ответить с цитированием
Старый 30.04.2020, 11:32
Arty
Выживальщик
 
Аватар для Arty
 
Регистрация: 04.07.2015
Адрес: Москва
Сообщений: 5,152
Сказал(а) спасибо: 2,055
Поблагодарили 4,567 раз(а) в 2,761 сообщениях
По умолчанию

Цитата:
Сообщение от Гастербайтер Посмотреть сообщение
Я вообще читал, что этим коронавирусом уже давно болели и многие переболели.
Скажи об этом шведам и англичанам. Одни до последнего не вводили ограничения, другие так и не ввели. И в обоих странах смертность крайне высокая. И где они болели? Ты все время лезешь туда, где знания околонулевые. Не стоит.
Arty вне форума   Ответить с цитированием
Старый 13.05.2020, 06:52
Скржитек
Модератор форума
 
Аватар для Скржитек
 
Регистрация: 22.06.2012
Адрес: ДальнийВосток
Сообщений: 9,216
Сказал(а) спасибо: 4,706
Поблагодарили 18,581 раз(а) в 7,224 сообщениях
По умолчанию


эпоха перемен... блин

Последний раз редактировалось Скржитек; 13.05.2020 в 11:07..
Скржитек вне форума   Ответить с цитированием
Старый 20.06.2020, 01:27
Satir
Готовящийся
 
Аватар для Satir
 
Регистрация: 26.09.2014
Адрес: Севернее не сошлют
Сообщений: 4,517
Сказал(а) спасибо: 1,691
Поблагодарили 4,772 раз(а) в 2,481 сообщениях
По умолчанию

Закупка оборудования была ещё в 2014 году, его необходимость значит поняли и обосновали ещё раньше...


<img src=http://s019.radikal.ru/i626/1604/d3/a8b4212219b1.jpg class=bbCodeImage border=0 alt= />
Никто не забыт!
Ничто не забыто!

Благими намерениями выстлан путь в Ад
Не делай добра - не будет и зла!

Мы убиваем время - оно убивает нас...
Не бойся делать то, чего не умеешь. Помни, Ковчег был построен любителем. Профессионалы построили Титаник.
Satir вне форума   Ответить с цитированием
Старый 21.06.2020, 05:41
Скржитек
Модератор форума
 
Аватар для Скржитек
 
Регистрация: 22.06.2012
Адрес: ДальнийВосток
Сообщений: 9,216
Сказал(а) спасибо: 4,706
Поблагодарили 18,581 раз(а) в 7,224 сообщениях
По умолчанию


эпоха перемен... блин
Скржитек вне форума   Ответить с цитированием
Старый 29.06.2020, 12:13
Скржитек
Модератор форума
 
Аватар для Скржитек
 
Регистрация: 22.06.2012
Адрес: ДальнийВосток
Сообщений: 9,216
Сказал(а) спасибо: 4,706
Поблагодарили 18,581 раз(а) в 7,224 сообщениях
По умолчанию



Скрижали Джорджии
Скрижали Джорджии (англ. Georgia Guidestones) — гранитный монумент в округе Элберт в штате Джорджия, США. Состоящий из шести гранитных плит монумент высотой около 6 метров и весом 119 тонн содержит надписи на восьми современных языках, включая русский, и четырёх древних. Скрижали были установлены местной фирмой Elberton Granite Finishing по заказу клиента, скрывшегося под псевдонимом; таинственность, окружающая возведение этой конструкции, и неоднозначный текст на Скрижалях послужили основанием для многочисленных теорий заговора.

Цитата:
Текст на русском языке гласит:

Пусть земное население никогда не превышает 500.000.000, пребывая в постоянном равновесии с природой.
Разумно регулируйте рождаемость, повышая ценность жизненной подготовки и многообразия человечества.
Найдите новый живой язык, способный объединить человечество.
Проявляйте терпимость в вопросах чувств, веры, традиций и им подобных.
Пусть справедливые законы и беспристрастный суд встанут на защиту народов и наций.
Пусть каждая нация сама решает свои внутренние дела, вынося на мировой суд международные проблемы.
Избегайте мелочных судебных тяжб и бесполезных чиновников.
Поддерживайте равновесие между личными правами и общественными обязанностями.
Превыше всего цените правду, красоту, любовь, стремясь к гармонии с бесконечностью.
Не будьте раковой опухолью для земли, природе тоже оставьте место!

эпоха перемен... блин
Скржитек вне форума   Ответить с цитированием
Старый 01.07.2020, 01:10
Satir
Готовящийся
 
Аватар для Satir
 
Регистрация: 26.09.2014
Адрес: Севернее не сошлют
Сообщений: 4,517
Сказал(а) спасибо: 1,691
Поблагодарили 4,772 раз(а) в 2,481 сообщениях
По умолчанию


<img src=http://s019.radikal.ru/i626/1604/d3/a8b4212219b1.jpg class=bbCodeImage border=0 alt= />
Никто не забыт!
Ничто не забыто!

Благими намерениями выстлан путь в Ад
Не делай добра - не будет и зла!

Мы убиваем время - оно убивает нас...
Не бойся делать то, чего не умеешь. Помни, Ковчег был построен любителем. Профессионалы построили Титаник.
Satir вне форума   Ответить с цитированием
Ответ

Опции темы
Опции просмотра

Ваши права в разделе
Вы не можете создавать новые темы
Вы не можете отвечать в темах
Вы не можете прикреплять вложения
Вы не можете редактировать свои сообщения

BB коды Вкл.
Смайлы Вкл.
[IMG] код Вкл.
HTML код Выкл.

Быстрый переход


Текущее время: 01:19. Часовой пояс GMT +3.